02-03-2018

BIOQUÍMICA CLÍNICA Y DIAGNÓSTICO

DE LABORATORIO I
Mónica Brito Wittwer
Clase 1

MIBW, 2018 1

1. Confirmar una impresión clínica

2. Establecer un diagnóstico
70% de las decisiones
3. Descartar un diagnóstico médicas
4. Controlar un tratamiento
5. Realizar exploración selectiva de una
enfermedad (tamizaje o screening)

Médico
Confiable
Oportuno

Solicitud de Examen
Entrega de Resultado

Toma de Muestra Procesamiento

Recepción Laboratorio

MIBW, 2018 2

Laboratorio Clínico
“Establecimiento público o privado en el cual se
realizan los procedimientos de análisis de
muestras biológicas, como apoyo a las
actividades de diagnóstico, prevención,
tratamiento, seguimiento, control y vigilancia de
las enfermedades, de acuerdo con los principios
básicos de calidad y bioseguridad”

MIBW, 2018 3

1
 02-03-2018

MIBW, 2018 4

https://es.slideshare.net/VernicaQuintero/l MIBW, 2018 5

aboratorio-clnico-13285098

Clasificación de Laboratorios Clínicos

REQUERIMIENTO
UBICACIÓN COMPLEJIDAD
DE RESPUESTA

Baja
Dependiente Inmediata
Mediana
Independiente No inmediata
Alta

Según dependencia Según tipo de

LAB. CENTRAL y
administrativa y exámenes
LAB. URGENCIA
origen de muestras realizados

MIBW, 2018 6

2
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MIBW, 2018 7

Conceptos asociados a los exámenes

de laboratorio

MAGNITUD PROCESAMIENTO REQUERIMIENTO

Det. única
Cualitativo
Manual Perfil
Semi- Cuant.
Automatizado Prueba Funcional
Cuantitativo
Cálculo

Glicemia
Intervalos de Perfil hepático
Equipos automatizados
referencia PTGO
Índice HOMA

MIBW, 2018 8

Tipos de Exámenes
Cualitativos Semi-cuantitativos Cuantitativos

• Detectan la • Identifican un rango • Determinan

presencia o de concentración exactamente la
ausencia de un de un analito concentración de
analito - describen presente en la un analito presente
cualidades muestra (Positivo, en la muestra
(Positivo, Negativo) +++) (100mg/dl)

MIBW, 2018 9

3
 02-03-2018

Interpretación de resultados:
Unidades de concentración
• Unidades convencionales
• Sistema Internacional de Unidades
• Transformación de unidades

MIBW, 2018 10

Interpretación de resultados:
Intervalos de referencia

95%

¿IR Glicemia = 70-99mg/dl?

•95% central de todos los valores de referencia biológicos

•Población de referencia (“aparentemente sanos”)
•Procedimiento empleado para la medida
•Determinar IR intralaboratorio (al menos país!)

MIBW, 2018 11

Conceptos asociados a los exámenes

de laboratorio

MAGNITUD PROCESAMIENTO REQUERIMIENTO

Det. única
Cualitativo
Manual Perfil
Semi- Cuant.
Automatizado Prueba Funcional
Cuantitativo
Cálculo

Glicemia
Intervalos de Perfil hepático
Equipos automatizados
referencia PTGO
Índice HOMA

MIBW, 2018 12

4
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MIBW, 2018 13

MIBW, 2018 14

Conceptos asociados a los exámenes

de laboratorio

MAGNITUD PROCESAMIENTO REQUERIMIENTO

Det. única
Cualitativo
Manual Perfil
Semi- Cuant.
Automatizado Prueba Funcional
Cuantitativo
Cálculo

Glicemia
Intervalos de Perfil hepático
Equipos automatizados
referencia PTGO
Índice HOMA

MIBW, 2018 15

5
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¿Cuáles son las pruebas incluidas en cada perfil?

• Perfil cardiaco (*)

• Perfil tiroideo (*)
MIBW, 2018 16

HOMA

PTGO
(Prueba de tolerancia a la glucosa oral)

MIBW, 2018 17

MIBW, 2018 18

6
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Evaluación de variaciones en la
Bioquímica concentración de analitos (moléculas)
Clínica presentes en distintos fluidos
biológicos, que evidencien cambios
fisiológicos y/o patológicos

¿Anemia? ¿Fx. Cardiaca? ¿Fx. Endocrina?

¿Enfermedad
¿Cáncer? ¿Metabolismo?
infecciosa?

¿Drogas abuso,
¿Fx. Renal? ¿Autoinmunidad?
terapeúticas?

MIBW, 2018 19

Bioquímica
¿Qué podemos analizar?
Clínica

Iones (Na+, K+, Cl-, Gases sanguíneos Enzimas (CK, Amilasa,

Mg2+, Ca2+…) (pCO2, pO2) LDH…)

Comp. orgánicos
Compuestos exógenos Proteínas (IgM a VHA,
endógenos (Urea,
(Fármacos, drogas de PSA, Albúmina,
Creatinina,
abuso) Transferrina….)
Bilirrubina….)

MIBW, 2018 20

Médico

Solicitud de Examen
Entrega de Resultado

Toma de Muestra
Procesamiento

Recepción Laboratorio

MIBW, 2018 22

7
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Fases de un examen de laboratorio

Pre - Analítica Analítica Post - Analítica

MIBW, 2018 23

Es determinante en la calidad de los

resultados que se van a obtener, porque
“ningún resultado puede ser mejor que la
muestra de la cual se obtuvo”.
En ella se produce el mayor número de
errores.

Pre - Analítica Analítica Post - Analítica

MIBW, 2018 24

Etapas de la Fase pre-analítica

• Solicitud de análisis por parte del clínico (orden médica)

• Preparación del paciente

• Recolección y transporte de la muestra

• Procesamiento pre-analítico

MIBW, 2018 25

8
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1. Orden médica

– Datos del paciente (nombre completo,

sexo, RUT, edad)
– Tipo solicitud (Urgencia)
– Procedencia (posible contacto)
– Exámenes Solicitados (Aislados o
Perfiles)

¿ERRORES?

MIBW, 2018 26

2. Preparación del paciente

a. Ayuno (8h = N)
– Modificación niveles de analitos: Glucosa, TG,
Insulina
– Interferencia analítica por lipemia

b. Dieta especial
– Caroteno post carga

c. Aseo previo
– Orina completa

d. Hora toma de muestra

– Ritmo circadiano: Hormonas (Ej. Cortisol)

MIBW, 2018 27

2. Preparación del paciente

e. Ejercicio y agitación
– Liberación desde músculo (↑ CK, GOT, LDH)
– Ventilación (Ej. pCO2, pO2)

f. Etapa del ciclo menstrual

– Hormonas sexuales

g. Consumo de alcohol, tabaco, medicamentos

– Modificación in vivo de niveles de diversos analitos
(Prolactina – Psicofármacos)
General:
– Interferencia analítica
1.-Instructivos impresos
2.- Registrar hora de toma muestra
3.- Registrar consumo de medicamentos
¿ERRORES? MIBW, 2018 28

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Etapas de la Fase pre-analítica

• Solicitud de análisis por parte del clínico (orden médica)

• Preparación del paciente

• Recolección y transporte de la muestra

• Procesamiento pre-analítico

MIBW, 2018 35

Tipo de muestras
• Sangre (suero, plasma)
– Punción venosa (adultos y pediátricos)
– Punción arterial
– Punción capilar
• Orina
– Aislada (*)
INVASIVAS - NO INVASIVAS
– De 24 horas
• Deposiciones
• Líquido Cefalorraquídeo
• Líquidos Serosos (pleural, pericárdico y peritoneal)
• Líquido Sinovial
• Líquido Seminal
• Sudor
• Saliva

MIBW, 2018 36

Sangre venosa vs arterial

Gases sanguíneos

MIBW, 2018 37

10
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Sistema de punción al vacío,

ventajoso porque…
VACUTAINER

Código de color Válvula de seguridad

Aguja de doble punta

Tubo estéril al vacío Soporte o adaptador

MIBW, 2018 38

Tamaño de tubos

MIBW, 2018 39

G = gauge
22G < Diámetro 20G
Mariposas

MIBW, 2018 40

11
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MIBW, 2018 41

Suero – Plasma
Anticoagulantes
Sangre + Anticoagulante = PLASMA

Sangre + 15’ = SUERO

– EDTA
– Citrato de Sodio
– Heparina de Sodio/Litio
– Oxalato de Potasio
El suero no contiene
¿Acción anticoagulante fibrinógeno
relacionada con el El plasma si contiene
mecanismo de fibrinógeno
coagulación sanguínea?
MIBW, 2018 42

Anticoagulantes
EDTA
 Na2 EDTA
 K3 EDTA
 Quelante de calcio (Ca++)
 Utilizado principalmente para Hematología
 Estudio fisicoquímico de líquidos y Hemoglobina Glicosilada

Citrato de Sodio
 C6H5O7 Na3 x 2H2O
 C6H5O7 Na3 x 11H2O
 Impide que el calcio se ionice, evitando así la coagulación
 Estudios de Coagulación
¿Acción anticoagulante
relacionada con el
mecanismo de
coagulación sanguínea?
MIBW, 2018 44

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Anticoagulantes
Heparina (litio o sodio)
 Anticoagulante fisiológico
 Impide que la protrombina se transforme en trombina
 Si no se mezcla uniforme e inmediatamente con la sangre
extraída pueden formarse microcoágulos
 Muy usada en Bioquímica Clínica

Fluoruro de sodio – Oxalato de Potasio:

 Oxalato de potasio, anticoagulante (pp calcio)
 Fluoruro de sodio, inhibidor de la glicólisis (enolasa)
 Glicemia (cuando la muestra no puede ser procesada
dentro de un plazo prudente (1-2 horas)
 Determinación de lactato y alcoholemia

MIBW, 2018 45

Código de colores
Tubos al vacío Tapa Gris: Tubo Estéril CON FLUORURO DE SODIO –
OXALATO DE POTASIO

MIBW, 2018 46

Código de colores
Tubos al vacío Tapa Gris: Tubo Estéril CON FLUORURO DE SODIO –
OXALATO DE POTASIO

PLASMA

SUERO

MIBW, 2018 47

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El orden de extracción de los tubos por sistema al vacío:

• Frascos de Hemocultivo
• Tubos SIN anticoagulante
• Tubo tapa celeste (citrato)
• Tubo tapa negra (citrato)
• Tubo tapa lila (EDTA)
• Tubo tapa verde, gris, etc. (heparina,
fluoruro, etc.)

MIBW, 2018 48

MIBW, 2018 49

Tipo de muestras
• Sangre (suero, plasma)
– Punción venosa (adultos y pediátricos)
– Punción arterial
– Punción capilar
• Orina
– Aislada (*)
INVASIVAS - NO INVASIVAS
– De 24 horas
• Deposiciones
• Líquido Cefalorraquídeo
• Líquidos Serosos (pleural, pericárdico y peritoneal)
• Líquido Sinovial
• Líquido Seminal
• Sudor
• Saliva

MIBW, 2018 50

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Muestras de Orina
• Se prefiere la orina de 1ª hora de la mañana
• Todos los elementos están más concentrados
Orina • Segundo chorro
aislada • Menores fluctuaciones en las determinaciones influidas por la
dieta, actividad física, etc.
• Al azar se acepta por urgencia con retención vesical de 3h

• Muestra homogénea y representativa de los analitos que se

excretan en forma inconstante a lo largo del día
• Registrar peso y estatura del paciente
Orina de 24 • Plástico, opaco, boca ancha, 3L, graduado
horas 1ª orina se elimina (d1)
24 horas
1ª orina se almacena (d2)

MIBW, 2018 51

Técnicas de recolección de orina

1. Micción previo aseo
2. Colección pediátrica (dispositivos plásticos)
3. Espécimen desde catéteres
4. Aspiración supra púbica: punción de vejiga con
jeringa, para análisis de microorganismos
anaerobios)

• Si el análisis demorará más de 2 horas el transporte deberá ser en frío (4º C) (PP uratos y fosfatos amorfos,
hemólisis)
• El procesamiento debe realizarse en las 2 a 3 horas recogida
• Las bacterias se multiplican constantemente a temperatura ambiente, pudiendo modificar la concentración
de glucosa y el pH.

MIBW, 2018 52

La zona a puncionar
debe ser lo más
alejada a la bolsa
recolectora de orina,
previa desinfección de
la zona

Cada 20 minutos
debe cambiar la
bolsa

MIBW, 2018 53

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Transporte de muestras
Evitar agitación (hemólisis)
Mantener y Transportar a 4ºC.
Proteger de la exposición directa a la luz (degradación de algunos analitos, por
ejemplo, bilirrubina o caroteno)
Mantener en posición vertical, con el tapón hacia arriba, lo que reduce la agitación
del tubo y favorece la formación completa del coágulo.

Tomar y transportar en contenedores de plástico desechables.

Mantener en posición vertical y a 4º C.
En pacientes pediátricos se recoge en bolsas de polietileno que pueden sellarse
para el transporte.

MIBW, 2018 54

Etapas de la Fase pre-analítica

• Solicitud de análisis por parte del clínico (orden médica)

• Preparación del paciente

• Recolección y transporte de la muestra

• Procesamiento pre-analítico

MIBW, 2018 55

Procesamiento pre-analítico

• Obtención de suero, plasma

– ¿Tiempo coagulación?
– 2500 -3000rpm x 10 minutos
– Procesamiento directo (Tubo Primario)

• Obtención pellet urinario

– Centrifugar la muestra a 1500 - 2000 rpm por 10 minutos
– Rescatar el sobrenadante
– Dejar el sedimento con un mínimo volumen
– Resuspender

MIBW, 2018 56

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Almacenamiento

• TA
• 37°C -20°C
• -80°C
• -120°C -20°C

4-10°C

MIBW, 2018 57

Decisión
clínica INTERPRETACÍÓN IR

Médico

Solicitud de Examen
Entrega de Resultado

Toma de Muestra Procesamiento

Recepción Laboratorio

MIBW, 2018 58

Variabilidad

¿Cómo se explica esto?

“Responsable de que los valores de un

determinado parámetro sean diferentes entre
diferentes individuos y de que incluso en una
misma persona difieran en el tiempo”

MIBW, 2018 59

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Variabilidad

Variabilidad

Debida a
Pre-analítica Biológica Analítica cambios en el
estado de salud

MIBW, 2018 60

Variabilidad pre-analítica
“Calidad de la “Ningún resultado es mejor que la muestra
muestra” de la cual se obtuvo”

• Ayuno
• Hora de toma de muestra
• Pacientes con vías
• Ejercicio intenso
• Tiempo de aplicación del torniquete
• Orina – aseo, eliminación primer chorro
• Tipo de anticoagulante
• Posición
• Consumo alcohol o tabaco
MIBW, 2018 61

Variabilidad biológica
Intraindividual

Interindividual

• Juan Niño – Juan Adulto

• Juan Adulto estresado – Juan Adulto

relajado

• Ana – Andrea (Inter, edad, raza, sexo, ciclo

menstual, alimentación, ejercicio, peso,
masa muscular, peso, localización
geográfica……)

https://www.westgard.com/biodatabase1.htm#pco2

MIBW, 2018 63

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Variabilidad analítica
Variabilidad
(Coeficiente
de Variación)

Debida a
cambios en el
Pre-analítica Biológica Analítica
estado de
salud

Imprecisión de un
método cuantitativo

Dispersión de los
valores obtenidos para
una misma muestra
alrededor del
promedio

MIBW, 2018 64

Variación total

Considerando variación preanalítica 0

MIBW, 2018 65

Causas frecuentes de rechazo de

muestras sanguíneas:
• Registro incorrecto de la orden médica
• Utilización de tubo inadecuado
• Muestra hemolisada (*)
• Muestra lipémica (*)
• Muestra coagulada
• Muestra insuficiente (*)
• Muestra no recibida
• Muestra mal identificada
• Muestra sin orden médica
• Temperatura de transporte inadecuada
• Recorrido preanalítico inadecuado

• (*) Criterio

MIBW, 2018 73

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¿Cuál es el problema de procesar una

muestra hemolizada o lipémica?

Elevación de
Interferencia concentración de
analítica analitos abundantes
dentro del GR
Hb, Turbidez
LDH, K+, GOT

MIBW, 2018 74

MIBW, 2018 75

HEMÓLISIS
• Intravascular (mínimo%)
• Punción/Transporte/Procesamiento
inadecuado

MIBW, 2018 76

20
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LDH
GOT

MIBW, 2018 77

Interferentes, “Validez del resultado”

HEMÓLISIS
ICTERICIA: (elevada
(modificación analitos
concentración de
por mayor
bilirrubina en suero o
concentración dentro
plasma)
del eritrocito)

LIPEMIA: (turbidez en FÁRMACOS: pueden

suero o plasma por interferir en la medida
aumento de de diversos analitos
lipoproteínas) (Ácido ascórbico)

¿NUEVA MUESTRA?
MIBW, 2018 78

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