【技术应用】FRET成像技术检测小细胞外囊泡上的糖基化RNA

荧光共振能量转移（Förster resonance energy transfer，FRET）是一种基于非辐射能量转移的荧光技术，能够在活细胞正常生理状态下检测分子间的相互作用和构象变化，广泛应用于生物医学研究。2025年3月24日，Ren T等人在《Nature communications》（IF 15.7）上发表的题为“FRET imaging of glycoRNA on small extracellular vesicles enabling sensitive cancer diagnostics”的文章中显示，该团队在FRET的基础上开发出了一种新型检测技术，建立了一种高灵敏、高特异的原位成像方法——双识别荧光共振能量转移（dual recognition Förster resonance energy transfer, drFRET），用于检测小细胞外囊泡（small extracellular vesicles, sEVs）表面的糖基化RNAs（glycoRNAs），并揭示了该技术在癌症诊断和sEVs生物学中的关键作用，为临床转化提供了重要工具。

glycoRNAs是近年来发现的一类膜相关糖分子，由RNA通过N-糖基化修饰（如N-乙酰神经氨酸，Neu5Ac）形成。本研究中，为实现对sEVs上glycoRNAs的原位成像，研究人员设计了drFRET，该技术在FRET基础上引入了双探针的设计，即糖链识别探针（Glycan recognition probes, GRPs）和RNA原位杂交探针（In situ hybridization probe, ISHPs）。GRPs与标记荧光供体Cy3共价结合，能够靶向glycoRNAs的Neu5Ac糖链部分。ISHPs与标记荧光受体Cy5结合，能够特异性结合glycoRNAs的RNA序列。当GRPs和ISHPs同时结合在同一glycoRNAs分子上，且距离<10 nm时，供体Cy3的激发态能量通过偶极-偶极耦合非辐射转移至受体Cy5，产生FRET信号。

图1 drFRET检测糖基化RNA原位成像原理（Ren T et al., 2025）。

通过将负载HeLa细胞来源sEVs的功能化聚苯乙烯微珠（fcPS）置于光学焦平面，观察校正后的FRET信号通道（cdFRET），验证了drFRET技术的有效性。结果显示，当drFRET所必须的双探针GRPs和ISHPs存在时，细胞培养基来源和血清样本来源的sEVs中都能检测到glycoRNAs的特异性FRET信号。该研究团队利用drFRET技术在7种癌细胞系来源的sEVs中鉴定出5种普遍存在的glycoRNAs；并对glycoRNAs的水平进行非加权求和（sEV^SUM）结合降维算法（如PCA）实现了6种癌症类型的自动分类与可视化，诊断准确率达到89％；并且证实glycoRNA与Siglec蛋白和P-选择素直接相互作用，调控sEV被靶细胞的内化。

图2 sEV糖基化RNA的cdFRET共聚焦成像结果。

参考文献

[1] Ren T, Zhang Y, Tong Y, et al. FRET imaging of glycoRNA on small extracellular vesicles enabling sensitive cancer diagnostics[J]. Nature Communications, 2025, 16(1): 3391.